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羊棘球蚴（包蟲）病間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

試劑盒由抗原包被板、血清稀釋板、酶標(biāo)二抗及其它試劑制成，利用間接ELISA方法檢測(cè)羊類血清中存在的棘球蚴特異性抗體，從而推斷羊類是否患有細(xì)粒棘球蚴(包蟲)病。

分類：

詳細(xì)信息

羊棘球蚴(包蟲)病間接ELISA檢測(cè)試劑盒  Indirect ELISA Kit For Hydatid Disease
使用說(shuō)明書
 
【簡(jiǎn)    介】
　　試劑盒由抗原包被板、血清稀釋板、酶標(biāo)二抗及其它試劑制成，利用間接ELISA方法檢測(cè)羊類血清中存在的棘球蚴特異性抗體，從而推斷羊類是否患有細(xì)粒棘球蚴(包蟲)病。
【用    途】
　　適用于羊棘球蚴（包蟲）病的血清學(xué)診斷。
【原    理】
　　本試劑盒利用棘球蚴三種主要特異性抗原組成的混合抗原包被微孔板。在試驗(yàn)中，若待測(cè)血清樣品中含有相應(yīng)的抗體，則將與檢測(cè)板上抗原結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。之后加入的酶標(biāo)二抗將與檢測(cè)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合，并可使TMB底物溶液形成藍(lán)色產(chǎn)物。顯色反應(yīng)經(jīng)終止液終止后呈黃色，最終通過(guò)測(cè)定450nm波長(zhǎng)下吸光度得到結(jié)果。
【試劑盒主要成分】 
1 抗原包被板 2塊   96孔/塊
2 陰性對(duì)照血清 1管   50μl /管
3 陽(yáng)性對(duì)照血清 1管   50μl /管
4 酶標(biāo)二抗 2管    0.2ml/管
5 25倍濃縮洗滌液 1瓶   25ml/瓶
6 底物溶液A 1瓶   10ml/瓶
7 底物溶液B 1瓶   10ml/瓶
8 終止液 1瓶   10ml/瓶
9 樣品稀釋液 2瓶   30ml/瓶
10 血清稀釋板 2塊   96孔/塊
11 說(shuō)明書 1張
【樣品制備】
取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血。
【試劑配制】
使用前，試劑盒內(nèi)除酶標(biāo)二抗外的各種試劑都應(yīng)恢復(fù)到室溫（25?C左右）。25倍濃縮的洗滌液恢復(fù)至室溫或略微加熱后搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解，然后用去離子水作25倍稀釋，稀釋好的洗滌液在2～8?C可以存放7天。酶標(biāo)二抗在使用前用樣品稀釋液按1:100倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。
【樣品稀釋】
    標(biāo)準(zhǔn)樣品與待檢樣品均在血清稀釋板中按1:40倍的體積稀釋（推薦稀釋方法：195µL樣品稀釋液中加5µL待檢血清樣品）。
【操作步驟】 
1、取抗原包被板，分別將稀釋好的待檢樣品和對(duì)照樣品各取100µL加入到抗原包被板孔中，陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2孔，置37?C溫育30分鐘。
2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200µL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
3、每孔加入稀釋好的酶標(biāo)二抗100µL，置37?C溫育30分鐘。
4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200µL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
5、每孔加入等體積混合好的底物溶液A 與底物溶液B 100µL，避光顯色10分鐘。
6、每孔加終止液50µL，10分鐘內(nèi)測(cè)定450nm波長(zhǎng)吸光度。
【結(jié)果判定】  
  參考農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2013年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》的通知，被檢抗體正向間接血凝實(shí)驗(yàn)抗體效價(jià)≥25為陽(yáng)性。根據(jù)該通知制定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：
 
1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)滿足下列條件，方為有效：
標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。
標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。
2 細(xì)粒棘球蚴(包蟲)病血清學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：
樣品OD450nm≤0.3，判為陰性，樣品暫未患有細(xì)粒棘球蚴(包蟲)病。
樣品OD450nm介于0.3與0.6之間，判為弱陽(yáng)性，對(duì)應(yīng)樣品處于細(xì)粒棘球蚴感染初期，尚未形成包囊或包囊不明顯。
樣品OD450nm≥0.6，判為陽(yáng)性，對(duì)應(yīng)樣品應(yīng)處于細(xì)粒棘球蚴感染后期，并形成較明顯的包囊。
樣品OD450nm處于0.3±0.02或者0.6±0.02兩個(gè)臨界值范圍內(nèi)，建議重復(fù)檢測(cè)，以確保結(jié)果準(zhǔn)確。
 
【注意事項(xiàng)】
1  樣品OD450nm≥0.6時(shí)有可能是接觸大量抗原導(dǎo)致，而非患有包蟲病，請(qǐng)確認(rèn)樣品未經(jīng)抗原免疫。
2  本底過(guò)高可導(dǎo)致結(jié)果整體水平偏高，實(shí)驗(yàn)過(guò)程需保證二抗清洗干凈。
3  環(huán)境溫度低于15?C可導(dǎo)致結(jié)果整體水平偏低，實(shí)驗(yàn)過(guò)程需保證環(huán)境溫度盡量接近25?C，或適當(dāng)延長(zhǎng)底物液顯色時(shí)間。
4  底物液A和底物液B不要暴露于強(qiáng)光，避免接觸氧化劑。 
5  濃縮洗滌液用去離子水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，應(yīng)水浴加熱使其溶解。
6   酶標(biāo)二抗應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。
7  4?C過(guò)夜孵育樣品及酶標(biāo)二抗可以獲得更好的結(jié)果。
 
【貯  存】  2～8?C避光保存 
【有 效 期】  9個(gè)月
【生產(chǎn)企業(yè)】  重慶澳龍生物制品有限公司
【地  址】  重慶市榮昌區(qū)板橋工業(yè)園區(qū)四支路五號(hào)      
【郵  編】  402460
【技術(shù)服務(wù)】  023-46763511                
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